土壤無機磷（S-PHOS）含量測定試劑盒說明書

                                              微量法100T/96S

注   意 ：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義：  

磷是植物必需大量元素。植物主要通過根系從土壤中獲取磷元素。土壤磷包括有機磷和無機磷。土壤有機磷經過礦化分解而轉化為無機磷，才能進一步被植物吸收利用。

測定原理：

從土壤中提取無機磷，在酸性環境中，通過鉬藍法定磷，即可計算出無機磷含量。

自備儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、臺式離心機、可調式水浴鍋，分析天平、可調式移液器、蒸餾水和100目篩子。

試劑組成和配制：

提取液：液體×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體×1瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前配制，加入8mL蒸餾水，充分溶解后加入4mL試劑二，混勻。

標準品：液體×1支，20μmol/L無機磷標準液，4℃保存。

土壤無機磷提取：

取10mL離心管，加入精確稱取的100目篩子過篩的風干土樣約0.01g，加入1mL提取液，震蕩混勻，然后置于40℃水浴浸提1h，8000g，25℃，離心10min，取上清液，待測。

測定步驟：

1. 分光光度計/酶標儀預熱30 min以上，調節波長到660 nm，蒸餾水調零。

2. 打開水浴鍋，調節溫度到40℃。

3. 空白管：取EP管，依次加入100μL蒸餾水，100μL試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度，記為A空白管。

4. 標準管：取EP管，依次加入10μL標準液，90μL蒸餾水，100μL試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度，記為A標準管。

5. 測定管：取EP管，依次加入10μL上清液，90μL蒸餾水，100μL試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度，記為A測定管。

需在40min內完成比色。

注意：空白管和標準管只需測定一次。

土壤無機磷含量計算公式：

a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下

S-PHOS（μmol /g 干重）=[C標準液×(A測定－A空白)÷(A標準－A空白)]×V總÷W

 =0.02×(A測定－A空白)÷(A標準－A空白)÷W

C標準液：20 μmol/L；V總：總上清液體積，1 mL=0.001 L；W：土壤樣品質量，g。

b.使用96孔板測定的計算公式如下

S-PHOS（μmol /g干重）=[C標準液×(A測定－A空白)÷(A標準－A空白)]×V總÷W

                      =0.02×(A測定－A空白)÷(A標準－A空白)÷W

C標準液：20 μmol/L；V總：總上清液體積，1 mL=0.001 L；W：土壤樣品質量，g。

注意事項：

1.        試劑三需臨用前配制，限當天使用。試劑三配制過程中，可能會產生黑色固體，其不影響結果，注意吸取時不要將黑色固體吸入。

2.        40min內完成比色。