土壤脂肪酶（Solid-Lipase，S-LPS）活性試劑盒說明書

                                                  微量法100/96S

注  意  ：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義：

LPS又稱甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和單酯）。LPS廣泛的存在于各種生物中。

測(cè)定原理：

LPS催化油酯水解成脂肪酸，利用銅皂法測(cè)定脂肪酸生成速率，即可計(jì)算LPS活性。

自備儀器和用品：

研缽、臺(tái)式離心機(jī)、震蕩混勻器、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、甲苯80mL、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：液體65mL×2瓶，4℃保存。

試劑二：液體10mL×1瓶，4℃保存。每次使用前用震蕩混勻器劇烈震蕩20min。

試劑三：甲苯80mL×1瓶，4℃保存（自備）。

試劑四：液體10mL×1瓶，4℃保存。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體10 μL×1瓶，10 µmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，4℃保存。臨用前加入3.168 mL甲苯，充分溶解。

樣本處理：

建議稱取約0.1g土樣，加入1mL試劑一進(jìn)行冰浴勻漿，再用回旋式振蕩器振蕩提取15min，4℃，4000g離心10min，取上清待測(cè)。

S-LPS測(cè)定操作：

1.        分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到710 nm，蒸餾水調(diào)零。

2.        試劑一和試劑二置于37℃水浴預(yù)熱30min。

3.        在1.5mL EP管中依次加入下列試劑

37℃振蕩反應(yīng)10 min

37℃振蕩反應(yīng)10 min后，8000g，25℃，離心10min，取上清液

37℃振蕩反應(yīng)5 min后，靜置5min，取200μL上層液加入微量石英比色皿/96孔板，于710nm處測(cè)定吸光值。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。

S-LPS活性計(jì)算公式：

活性單位定義：37℃中每克土樣每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個(gè)酶活單位。

S-LPS (μmol/min/g 土樣) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測(cè)定管-A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T

=16×[(A測(cè)定管－A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]÷W

C標(biāo)準(zhǔn)品：10 µmol/mL；V反總：反應(yīng)總體積，0.8mL；V樣：反應(yīng)中加入樣本體積，0.05mL；V樣總：加入提取液體積，1mL； W：樣本質(zhì)量，g；T：催化反應(yīng)時(shí)間，10 min。