鼠疫桿菌（YP-PLA/CA/3A）熒光PCR試劑盒

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：鼠疫桿菌（YP-PLA/CA/3A）熒光PCR試劑盒

Name：Yersinia pestis (YP-PLA/CA/3A) fluorescent PCR kit

【包裝規(guī)格】50T/盒

【預期用途】

本試劑盒適用于檢測氣管分泌物拭子、肺組織等樣本中的鼠疫桿菌，用于鼠疫桿菌感染的輔助診斷，其檢測結果僅供參考。

【檢驗原理】

本試劑盒采用 TaqMan 探針法實時熒光 PCR 技術，設計一對鼠疫桿菌特異性引物，結合一條特異

性探針，用熒光 PCR 技術對鼠疫桿菌的 DNA 進行體外擴增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學

診斷。

【試劑組成】

說明：不同批號的試劑盒組分不可交互使用。

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運輸、反復凍融次數(shù)不超過 5 次，有效期 12 個月。

【適用儀器】

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

鼠疫桿菌(Yersinia pestis)屬于耶爾森氏菌屬(Yersinia)。它是引起烈性傳染病鼠疫(Plague)的病原菌 ，同時也是帝國主義和霸權主義者使用的致死性細菌戰(zhàn)劑之一 。曾在歐洲引起大規(guī)模疾病死亡，在二戰(zhàn)中也有使用記錄。

鼠疫桿菌的檢驗必須嚴格執(zhí)行烈性菌管理規(guī)則，注意防止氣溶膠感染或防蚤叮咬。動物實驗應有防護設備，實驗用過培養(yǎng)物及器材應及時消毒。取檢材涂片，用甲醇或酒精乙-醚混合液固定5~10分鐘，然后進行革氏或美蘭染色，鏡檢觀察鼠疫桿菌的形態(tài)特征。將檢材劃線接種于普通瓊脂平板上，龍膽紫血瓊脂平板及厚金格爾(hottinger)瓊脂平板上。28℃孵育48小時后觀察菌落特征，挑取可疑菌落，涂片、染色、鏡檢。必要時，接種厚金格爾斜面和肉湯，作噬菌體裂解、凝集或沉淀試驗等進一步鑒定。確診第一例鼠疫報告時，須作豚鼠皮下或擦皮接種試驗。

PCR技術，即聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）是由美國PE Cetus公司的Kary Mullis在1983年（1993年獲諾貝爾化學獎）建立的。這項技術可在試管內(nèi)的經(jīng)數(shù)小時反應就將特定的DNA片段擴增數(shù)百萬倍，這種迅速獲取大量單一核酸片段的技術在分子生物學研究中具有舉足輕重的意義，極大地推動了生命科學的研究進展。它不僅是DNA分析常用的技術，而且在DNA重組與表達、基因結構分析和功能檢測中具有重要的應用價值。

PCR可以被認為是與發(fā)生在細胞內(nèi)的DNA復制過程相似的技術，其結果都是以原來的DNA為模板產(chǎn)生新的互補DNA片段。細胞中DNA的復制是一個非常復雜的過程。參與復制的有多種因素。PCR是在試管中進行的DNA復制反應，基本原理與細胞內(nèi)DNA復制相似，但反應體系相對較簡單。

PCR由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成：①模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至94℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應做準備；

②模板DNA與引物的退火(復性)：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合；

③引物的延伸：DNA模板--引物結合物在Taq酶的作用下，以dNTP為反應原料，靶序列為模板，按堿基配對與半保留復制原理，合成一條新的與模板DNA 鏈互補的半保留復制鏈。

重復循環(huán)變性--退火--延伸三過程，就可獲得更多的“半保留復制鏈"，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個循環(huán)需2～4分鐘， 2～3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。

【注意事項】

1.所有操作嚴格按照說明書進行；

2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應自然融化，*混勻并短暫離心；

3.反應液應避光保存；

4.反應中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；

5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服；

6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行，以免交叉污染；

7.實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；

8.試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全通則》進行處理。