蔗糖磷酸化酶(SP)測試盒說明書

微量法100T/96S

 測定意義：

SP(EC2.4.1.7) 要存在于微生物和植物中，裂解葡萄糖苷鍵，催化葡萄糖基轉移到果糖 木糖 半乳糖和鼠李糖等，合成相應的葡萄糖基 聚糖 外，SP 還能催化氫/醌合成熊果苷，具有ji強的美白效果，在化妝品工業中具有重要應用

測定原理：

SP 能夠以磷酸體，催化蔗糖產生 1-磷酸葡萄糖，在葡萄糖磷酸 酶催化6-磷酸葡萄糖，在 6-磷酸葡萄糖脫氫酶作用還原 NADP+生成 NADPH，導340nm光吸收值增測定 340nm 吸光度增 速率，即可算SP活性                                

自備實驗用品及儀器：                                                               

天平溫離心機  恒溫水浴鍋  紫外分光光度  /酶標儀  微  石英比色皿/96 孔板和蒸餾水                                                                                                

試劑組成和配制：                                                                        

提  液  液體 100mL×1 瓶，4℃保存                                                    

緩沖液  液體 10mL×1 瓶，4℃保存                                                      

試劑一  液體 5mL×1 瓶，4℃保存                                               

試劑二  液體 1.5mL×1 支，4℃保存                                                     

試劑         液體 1mL×1 支，4℃保存                                               

試劑四     粉劑 1 支，-20℃避光保存，臨用前 1mL 蒸水溶解                           

試劑五     粉劑 1 支，-20℃避光保存，臨用前 1mL 蒸水溶解                           

試劑         粉劑 1 支，-20℃避光保存，臨用前 2mL 蒸水溶解                           

試劑七  粉劑 1 支，-20℃避光保存，臨用前 2mL 蒸水溶解                           

粗酶液提取：                                                                                  

1.      組按照組質g提液體  (mL)  15~10 的比例 建議約0.1g組，入1mL提液 進行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃，離心 10min，清測

2.      菌真菌按照胞數104 個提液體mL500~10001 的比例建議500萬胞入1mL提液 ，冰浴超聲波破碎胞率300w，超聲 3         ，間隔7，總時間 3min然后10000g，4℃，離心 10min，清置于冰測       

測定操作表：

1分光光度 /酶標儀預熱 30min，調節波長 340nm 2、操作表

SP 活性計算公式：

a.用微量石英比色皿測定的計算公式

1.    按照蛋白濃度  算

酶活定義  37℃，pH6.8 時，  毫克蛋白質  分鐘催化產生 1nmol NADPH                      一個酶活單

ε × d

2.  按照樣本質             算

酶活定義  37℃，pH6.8 時，

克樣本  分鐘催化產生 1nmol NADPH               一個酶活單

ε × d

3.    按照  胞數算

酶活定義  37℃，pH6.8 時，            10⁴ 個  胞  分鐘催化產生 1nmol NADPH               一個酶活單

ε × d

A÷  胞數            萬個

ε       NADPH 摩爾消光系數，6220 L/mol/cm  d  比色皿光  ，1cm  V

體  ，2mL V 樣             應體系中樣本體     ，0.2mL     W 樣本質  ，g Cpr

總         應體系總

蛋白濃度，mg/mL

T               應時間，2min

b.用 96 孔板測定的計算公式

1.    按照蛋白濃度  算

酶活定義  37℃，pH6.8 時，  毫克蛋白質  分鐘催化產生 1nmol NADPH                      一個酶活單

ε × d

3.  按照樣本質             算

酶活定義  37℃，pH6.8 時，

克樣本  分鐘催化產生 1nmol NADPH               一個酶活單

ε × d

3.    按照  胞數算

酶活定義  37℃，pH6.8 時，            10⁴ 個  胞  分鐘催化產生 1nmol NADPH               一個酶活單

ε × d

△A÷  胞數            萬個

ε      NADPH 摩爾消光系數，6220 L/mol/cm  d  比色皿光  ，0.5cm  V                       總         應體系總

體  ，2mL V 樣             應體系中樣本體     ，0.2mL     W 樣本質  ，g Cpr 蛋白濃度，mg/mL

T               應時間，2min

注意事項：

1.        粉劑-20℃保存，配制好的試劑 3 天內使用完

2.        可選用 BCA 法測定蛋白含  試劑盒測定蛋白含

蔗糖磷酸化酶(SP)測試盒僅供科研！